
高效液相色譜分析法(HPLC),它的基本概念及理論基礎(chǔ)(如保留值、塔板理論、速率理論、容量因子、分離度等),與氣相色譜是一致的,但又有不同之處。
高效液相色譜與氣相 色譜的主要區(qū)別可歸結(jié)于以下幾點(diǎn):
(1) 進(jìn)樣方式的不同:高效液相色譜只要將樣品制成溶液,而氣相色譜需加熱氣化或裂 解;
(2) 流動(dòng)相的不同,在被測(cè)組分與流動(dòng)相之間、流動(dòng)相與固定相之間都存在著一定的相 互作用力;
(3) 由于液體的粘度較氣體大兩個(gè)數(shù)量級(jí),使被測(cè)組分在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在 氣體流動(dòng)相中約小4~5個(gè)數(shù)量級(jí);
(4) 由于流動(dòng)相的化學(xué)成分可進(jìn)行廣泛選擇,并可配置成二元或多元體系,滿(mǎn)足梯度洗 脫的需要,因而提高了高效液相色譜的分辨率(柱效能);
(5) 高效液相色譜采用5~10Lm細(xì)顆粒固定相,使流體相在色譜柱上滲透性大大縮小,流動(dòng)阻力增大,必須借助高壓泵輸送流動(dòng)相;
(6) 高效液相色譜是在液相中進(jìn)行,對(duì)被測(cè)組分的檢測(cè),通常采用靈敏的濕法光度檢測(cè) 器,例如,紫外光度檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、熒光光度檢測(cè)器等;
(7) 液相色譜與氣相色譜相比較,高效液相色譜同樣具有高靈敏度、高效能和高速度的 特點(diǎn)。 高效液相色譜的定性和定量分析,與氣相色譜分析相似, 在定性分析中,采用保留值定性,或與其他定性能力強(qiáng)的儀器分析法連用;在定量分析中,采用測(cè)量峰面積的歸一化法、內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法等,但高效液相色譜在分離復(fù)雜組分式樣時(shí),有些組分常不能出峰,因此歸一化法定量受到限制,而內(nèi)標(biāo)法定量則被廣泛使用。
根據(jù)物質(zhì)的光譜來(lái)鑒別物質(zhì)及確定它的化學(xué)組成和相對(duì)含量的方法叫光譜分析。其優(yōu)點(diǎn)是靈敏,迅速.歷史上曾通過(guò)光譜分析發(fā)現(xiàn)了許多新元素,如銣,銫,氦等.根據(jù)分析原理光譜分析可分為發(fā)射光譜分析與吸收光譜分析二種;根據(jù)被測(cè)成分的形態(tài)可分為原子光譜分析與分子光譜分析。光譜分析的被測(cè)成分是原子的稱(chēng)為原子光譜,被測(cè)成分是分子的則稱(chēng)為分子光譜。