化學(xué)藥品企業(yè)在藥品研發(fā)、生產(chǎn)及質(zhì)量控制過(guò)程中，高效液相色譜儀（HPLC）是核心分析設(shè)備之一，廣泛應(yīng)用于成分定量、雜質(zhì)檢測(cè)、穩(wěn)定性研究、工藝驗(yàn)證及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立等環(huán)節(jié)。以下是化學(xué)藥品企業(yè)需使用液相色譜儀的典型檢測(cè)項(xiàng)目及應(yīng)用場(chǎng)景：

一、原料藥（API）檢測(cè)

1. 含量測(cè)定

• 檢測(cè)對(duì)象：主成分含量（如抗生素類(lèi)、甾體激素類(lèi)、心血管類(lèi)藥物）。

• 示例：

• 阿莫西林原料藥：HPLC 法測(cè)定含量（《中國(guó)藥典》規(guī)定按干燥品計(jì)算，含 C??H??N?O?S 不得少于 95.0%）。

• 布洛芬原料藥：檢測(cè) R/S 異構(gòu)體比例（需符合光學(xué)純度要求）。

• 檢測(cè)目的：確保原料藥符合法定標(biāo)準(zhǔn)，保證藥效。

2. 有關(guān)物質(zhì)檢查

• 檢測(cè)對(duì)象：工藝雜質(zhì)（如中間體、副產(chǎn)物）、降解產(chǎn)物（如氧化產(chǎn)物、水解產(chǎn)物）。

• 示例：

• 奧美拉唑原料藥：檢測(cè)雜質(zhì) A（5 - 甲氧基 - 2-[[(4 - 甲氧基 - 3,5 - 二甲基 - 2 - 吡啶基) 甲基] 亞磺?；鵠-1H - 苯并咪唑）等特定雜質(zhì)。

• 鹽酸左氧氟沙星：檢查光學(xué)異構(gòu)體（右氧氟沙星），限量≤1.0%。

• 檢測(cè)依據(jù)：《ICH Q3A (R2)：新原料藥中的雜質(zhì)》及各國(guó)藥典。

3. 殘留溶劑測(cè)定

• 檢測(cè)對(duì)象：生產(chǎn)過(guò)程中殘留的有機(jī)溶劑（如甲醇、乙腈、二氯甲烷）。

• 檢測(cè)方法：HPLC-UV（揮發(fā)性較低的溶劑）或 HPLC-MS（痕量溶劑）。

• 限量標(biāo)準(zhǔn)：參照《ICH Q3C：殘留溶劑指導(dǎo)原則》，如一類(lèi)溶劑苯≤2ppm。

二、制劑檢測(cè)

1. 含量均勻度與溶出度

• 檢測(cè)對(duì)象：

• 小劑量制劑（如 25mg 以下片劑）的含量均勻度。

• 緩控釋制劑、難溶性藥物制劑的溶出曲線(xiàn)。

• 示例：

• 硝苯地平緩釋片：采用 HPLC 測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的釋放量，與參比制劑對(duì)比溶出曲線(xiàn)。

• 檢測(cè)目的：確保每片 / 粒藥物的有效成分含量一致，且釋放符合設(shè)計(jì)要求。

2. 穩(wěn)定性研究

• 加速試驗(yàn)與長(zhǎng)期試驗(yàn)：通過(guò) HPLC 監(jiān)測(cè)藥物在不同條件（如高溫、高濕、光照）下的降解產(chǎn)物。

• 示例：

• 阿司匹林腸溶片：檢測(cè)水解產(chǎn)物水楊酸（加速試驗(yàn)中水楊酸含量不得超過(guò) 0.3%）。

• 數(shù)據(jù)用途：制定有效期、儲(chǔ)存條件及包裝材料選擇依據(jù)。

3. 輔料相容性研究

• 檢測(cè)對(duì)象：藥物與輔料（如淀粉、纖維素衍生物）混合后的化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)物。

• 方法：將藥物與輔料按比例混合，加速條件下放置，HPLC 檢測(cè)新雜質(zhì)生成。

• 目的：篩選適合的輔料，避免配伍禁忌。

三、質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)建立

1. 雜質(zhì)譜分析

• 檢測(cè)對(duì)象：全面鑒定與定量藥物中的已知雜質(zhì)、未知雜質(zhì)。

• 方法：

• HPLC-MS/MS：對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證（如分子量、碎片離子）。

• 二極管陣列檢測(cè)器（DAD）：檢測(cè)雜質(zhì)的紫外吸收光譜，輔助定性。

• 標(biāo)準(zhǔn)制定：根據(jù)雜質(zhì)毒性確定報(bào)告閾值（如 > 0.05% 需報(bào)告）、鑒定閾值（>0.10% 需鑒定）。

2. 效價(jià)測(cè)定

• 生物活性藥物（如胰島素、肝素）：通過(guò) HPLC 測(cè)定活性成分含量，結(jié)合生物學(xué)方法（如效價(jià)測(cè)定）。

• 示例：

• 重組人胰島素注射液：HPLC 法測(cè)定胰島素含量，需符合《中國(guó)藥典》效價(jià)要求（每 1mg 效價(jià)不得少于 26.0 單位）。

3. 基因毒性雜質(zhì)檢測(cè)

• 檢測(cè)對(duì)象：潛在致癌物（如 N - 亞硝胺類(lèi)、磺酸酯類(lèi)）。

• 方法：HPLC-MS/MS（靈敏度可達(dá) ng/g 級(jí)）。

• 典型案例：纈沙坦中 N - 亞硝基二甲胺（NDMA）的檢測(cè)（限量≤0.3ppm）。

四、工藝驗(yàn)證與生產(chǎn)過(guò)程監(jiān)控

1. 中間體監(jiān)控

• 檢測(cè)對(duì)象：合成過(guò)程中的關(guān)鍵中間體（如頭孢類(lèi)藥物的 7-ACA）。

• 目的：優(yōu)化反應(yīng)條件，確保中間體質(zhì)量符合下一步反應(yīng)要求。

2. 清潔驗(yàn)證

• 檢測(cè)對(duì)象：生產(chǎn)設(shè)備殘留的藥物活性成分、清潔劑。

• 方法：HPLC 檢測(cè)設(shè)備表面擦拭樣品或淋洗水。

• 接受標(biāo)準(zhǔn)：殘留量≤10ppm 或前一批產(chǎn)品最小日劑量的 1/1000。

五、液相色譜技術(shù)在化藥檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)

1. 高靈敏度：

• 紫外檢測(cè)器（UV）：檢測(cè)限可達(dá) μg/mL 級(jí)；

• 質(zhì)譜聯(lián)用（MS）：檢測(cè)限低至 ng/mL 甚至 pg/mL，適用于痕量雜質(zhì)分析。

2. 寬適用性：

• 反相色譜（RP-HPLC）：分析極性至中等極性化合物（如生物堿、苷類(lèi)）；

• 正相色譜：分離極性較強(qiáng)的化合物（如糖、氨基酸）；

• 離子交換色譜：檢測(cè)有機(jī)酸、有機(jī)堿及鹽類(lèi)。

3. 自動(dòng)化與數(shù)據(jù)可靠性：

• 自動(dòng)進(jìn)樣器：實(shí)現(xiàn) 24 小時(shí)連續(xù)檢測(cè)，提高效率；

• 電子記錄與審計(jì)追蹤：滿(mǎn)足 GMP、FDA 21 CFR Part 11 等法規(guī)對(duì)數(shù)據(jù)完整性的要求。

六、典型檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與法規(guī)依據(jù)

• 《中國(guó)藥典》：化學(xué)藥品的含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì)檢查等 90% 以上采用 HPLC 法。

• 國(guó)際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）：

• Q3A (R2)：原料藥雜質(zhì)；

• Q6A：新原料藥和制劑的規(guī)格；

• Q1A (R2)：穩(wěn)定性試驗(yàn)。

• 美國(guó) FDA：《藥物分析方法驗(yàn)證指南》（2018）。

總結(jié)

化學(xué)藥品企業(yè)需根據(jù)藥品類(lèi)別（如小分子化藥、多肽藥物、寡核苷酸藥物）及研發(fā)階段（臨床前、臨床、上市后），配置不同類(lèi)型的液相色譜系統(tǒng)。例如：

• 常規(guī)檢測(cè)：配置 HPLC-UV/DAD 系統(tǒng)，滿(mǎn)足含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì)檢查；

• 高端需求：配備 HPLC-MS/MS 系統(tǒng)，用于基因毒性雜質(zhì)、生物藥分析；

• 特殊樣品：使用超高效液相色譜（UPLC）縮短分析時(shí)間，提高分離效率。
  通過(guò)液相色譜技術(shù)的精準(zhǔn)應(yīng)用，企業(yè)可實(shí)現(xiàn)從原料采購(gòu)、生產(chǎn)過(guò)程到成品放行的全生命周期質(zhì)量控制，確保藥品安全、有效、質(zhì)量可控。